abts溶液配制步骤_ABTS溶液配制步骤

       对于abts溶液配制步骤的问题，我有一些了解和研究，也可以向您推荐一些专业资料和研究成果。希望这对您有所帮助。

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2.as溶于正己烷吗

3.ELISA试剂盒有几种检测方法

4.如何设计一种检测动物或植物中某的免疫学方法(只有已知的该标准抗原)

5.ABTS+测抗氧化性原理是什么

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       ABTS

       中文名：2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐

       别名：2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)

       分子式：C18H24N6O6S4 分子量：548.68

       ABTS的配制

       试剂一：0.0384gABTS定容到10mL

       试剂二：0.0134g过硫酸钾定容到10mL

       试剂一与试剂二1：1混合

       12h避光后 得 ABTS工作液

       使用之前以pH7.4的PBS稀释20倍

as溶于正己烷吗

       总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method，简称T-AOC Assay Kit，是一种用2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid(ABTS)作为显色剂，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。

ELISA试剂盒有几种检测方法

       ABTS使用广泛间接检测用于亲水性亲脂性物质抗氧化能力测定ABTs经氧化稳定蓝绿色阳离自由基ABTs+·能溶于水相或酸性乙醇介质414、645、734815nm处吸收测物质加入ABTS+·溶液所含抗氧化能与ABTs+·发反应使反应体系褪色ABTs+·吸收波(般选择734nm)检测吸光度变化

       具体也可以自己查阅资料

       不懂可以追问.

如何设计一种检测动物或植物中某的免疫学方法(只有已知的该标准抗原)

       双抗体夹心法

       1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃?过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

       2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃?孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

       3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃?孵育0.5～1小时，洗涤。

       4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃?10～30分钟。

       5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

       6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

       间接法

       1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

       2.次日洗涤3次；

       3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

       4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

       5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

       6.’最后一遍用DDW洗涤。

       其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

ABTS+测抗氧化性原理是什么

       这个得具体问题具体分析。看你想达到什么检测目的了，另外还得看是什么，存在于动植物什么部位。最简单的就是沉积实验：用标准抗原免疫鼠或兔等使其产生抗体，再用其血清作个沉积实验就可以了。这个实验不敏感，需要抗原抗体量较大，如果是特殊或是感染初期，则检测不到。如果你有条件的话可以做ELISA，这个实验敏感性强。

       一,基本原理

       它用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定.测定的对象可以是抗体也可以是抗原.

       在这种测定方法中有3种必要的试剂:

       ①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)

       ②酶标记的抗原或抗体(标记物)

       ③酶作用的底物(显色剂)

       测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,

       再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色.

       其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比.

       这种有色产物可用肉眼,光学显微镜,电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定.

       其方法简单,方便讯速,特异性强.

       二,酶及其底物

       酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物.是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物 ,将得到不同的颜色反应.

       360,450

       420

       荧光

       **

       甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)

       硝基酚半乳糖苷(ONPG)

       β-D-半乳糖苷酶

       405

       420

       **

       深蓝色

       ABTS+HRP+葡萄糖

       葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰

       葡萄糖氧化酶

       400

       500

       **

       红色

       4-硝基酚磷酸盐(PNP)

       萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐

       碱性磷酸酯酶

       492

       460

       449

       425

       642

       橘红色

       **

       棕色

       兰色

       蓝绿色

       邻苯二胺

       四甲替联苯胺

       氨基水杨酸

       邻联苯甲胺

       2,2'-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐

       辣根过氧化物酶

       测定波长

       显色反应

       底 物

       酶

       ELISA的种类和变化

       (一)双抗体夹心法

       (二)间接法

       (三)竞争法

       (四)双位点一步法

       (五)捕获法测IgM抗体

       (六)应用亲和素和生物素的ELISA

       (一)双抗体夹心法

       此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原

       获得待分析物的未标定抗体

       将特异性抗体与固相

       载体连接形成固相抗体

       洗涤除去未结合的

       抗体及杂质

       加入封闭蛋白溶液以封闭载体

       表面残留的蛋白结合位点

       洗涤并除去未结合的封闭蛋白

       加受检标本(抗原)形成

       固相抗体-抗原复合物

       洗涤除去其他

       未结合的物质

       加酶标抗体生成

       抗体—待测抗原—酶标记抗体

       的复合物

       彻底洗涤

       未结合的

       酶标抗体

       加底物进行

       酶催化反应

       根据颜色反应的

       程度进行该抗原

       的定性或定量测定

       间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法.

       (二)间接法

       包被固相载体:

       用已知抗原包被

       固相载体

       加待检标本:

       使相应抗体与固相抗原结合

       洗涤,除去无关的物质

       加酶标抗抗体:

       与固相载体上抗原抗体

       复合物结合;洗涤,除去

       未结合的酶标抗抗体

       加底物

       显色

       根据颜色反应的程度进行

       该抗原的定性或定量测定

       (三)竞争法

       此法可用于抗原和半抗原的定量测定,也可用于测定抗体 .

       用已知特异性

       抗体包被

       固相载体

       测定管加待测抗原和

       一定量的酶标抗原使二者与

       固相抗体竞争结合

       对照管只加一定量酶标抗原

       与固相抗体直接结合

       分别洗涤

       除去未结合

       的成分

       加底物显色

       分别测定两管的吸光度值,

       根据对照管与测定管吸光度值之比,

       计算标本中待测抗原含量

       对照管由于只加酶标抗原,与固相抗体充分结合,故分解底物显色深;测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异.如待测抗原量多,竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合,使固相上结合的酶标抗原量减少.因此,加入底物后显色反应较弱.

       特点一:灵敏性

       该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶.众所周知, 酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象.因此该体系常被称为酶放大体系.ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克,甚至纳克水平上对其进行定量.

       例如,在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为mg/ml水平,酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml .

       特点二:特异性

       其特异性来自抗体或抗原的选择性.抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间.由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性.

       例如乙肝中的表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg)和核心抗体(HBcAg),虽来源于同一,但仅与其相应的抗体结合,而不与另外两种抗体反应.抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物(例如血清)中测定某一特定的物质,而不需先分离待检物.

       ELISA应用实例

       饲料中盐酸克伦特罗的测定

       饲料中毒素的测定(主要包括黄曲霉毒素, 简曲霉毒素 )

       饲料中有害微生物的快速筛检 (如沙门氏菌 )

       甲胺磷残留分析

       甲基对硫磷残留分析

       呋喃丹残留分析

       ELISA在饲料安全检测中的应用

       ELISA用于农药残留的检测

       河豚毒素

       植物毒素如**碱,,藻类毒素

       苯并芘

       主要有除草剂与杀虫剂两大类

       例如杀暝松( FN ),

       甲氟磷酸异已酶( SOMAN ),

       草不绿( Alachor ),

       西维因( Carbaryl ),

       多菌灵及克菌丹( Captan )等.

       农药的检测:

       ELISA检测 "非典型肺炎"冠状

       ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白A2(hnRNPA2)/类风湿性关节炎(PtA)33抗体

       ELISA在疾病诊断中的作用

       ELISA法检测幽门螺杆菌抗体

       ELISA试剂盒商业资讯

       ELISA试剂盒

       酶联免疫井

       DNM-9602G酶标分析仪

       DNM-9602 标配酶标分析仪

       DNM-9602A酶标分析仪

       几种酶标分析仪

       (一) 原理

        ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

       (二) 操作步骤

        方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

        1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

        2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

        3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

        4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

        5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

        6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

        方法二 用于检测未知抗体的间接法：

        用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

       (三) 试剂器材

        1. 试剂

        (1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

        NaCO3　1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml

        (2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸馏水至1000ml

        (3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5～10％使用。

        (4) 终止液(2M H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。

        (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克／L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。

        (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg／5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml0.75％H2O2 32μl

        (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3％H2O2 2μl

        (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。

        (9) 正常人血清和阳性对照血清。

        2. 器材:

        (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。

        (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。

        (3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。

       (四) 注意事项

        1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

        2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

        (1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

        （2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

        (3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

        (4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

       ABTS+测抗氧化性原理是通过漆酶氧化ABTS的速率来决定漆酶酶活力的大小。

       2

       ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐，如果与过二硫酸钾反应，可以生成绿色的ABTS自由基。该自由基在734nm有最大吸收，所以，通过检测734nm的吸光度，可以测定的其浓度。

       一个物质加入到ABTS自由基溶液后，如果734nm的吸光度降低，则说明该物质具有自由基清除活性，属于抗氧化剂。该法称为ABTS自由基清除法，可以用评价植物（或中草药抽提物）、纯化合物的抗氧化能力的。

       此外，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。

扩展资料

       以ABTS（7mmol, 10 equiv.）+K2S2O8(4.9mmol, 7

       equiv.)的水溶液按1:1的体积比混合，避光情况下储存12-16h，第二天以乙醇稀释40-60倍，摇匀，静置5min，放入比色皿中测734nm的吸光度（0.7左右）。

       测试吸光度随时间变化关系，时长为30min，发现吸光度有很明显的下降，30min大概降到0.45左右，换做水稀释时，吸光度下降更为严重，30min大概降到0.15左右。后面要测特定物质湮灭自由基的能力，这种情况势必严重干扰结果。

       不过，ABTS自由基的生成需要过二硫酸钾氧化，所以，是一个混合物。而且，反应通常需要12小时，比较耗时。用PTIO自由基替代ABTS自由基进行实验，取得不错的实验结果。PTIO自由基不需要氧化，可以现成的化学品溶于水配制，另外，由于反应是在水溶液或者缓冲液中进行，具有更强的生物相关性。

       百度百科-ABTS

       好了，今天我们就此结束对“abts溶液配制步骤”的讲解。希望您已经对这个主题有了更深入的认识和理解。如果您有任何问题或需要进一步的信息，请随时告诉我，我将竭诚为您服务。